對(duì)于一個(gè)未知樣品，首先要了解它的來(lái)源、性質(zhì)、分析目的；在此基礎(chǔ)上，對(duì)樣品可有初步估計(jì)；再結(jié)合已知純物質(zhì)或有關(guān)的色譜定性參考數(shù)據(jù)，用一定的方法進(jìn)行定性鑒定。如何玩轉(zhuǎn)GC法分析樣品？先來(lái)看看下面的內(nèi)容。
1.樣品的來(lái)源和預(yù)處理方法
GC能直接分析的樣品通常是氣體或液體，固體樣品在分析前應(yīng)當(dāng)溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲校疫€要保證樣品中不含GC不能分析的組分(如無(wú)機(jī)鹽)，可能會(huì)損壞色譜柱的組分。因此在接到一個(gè)未知樣品時(shí)，必須了解來(lái)源，從而估計(jì)樣品可能含有的組分，以及樣品的沸點(diǎn)范圍。如果樣品體系簡(jiǎn)單，試樣組分可汽化則可直接分析。如果樣品中有不能用GC直接分析的組分，或樣品濃度太低，就必須進(jìn)行必要的預(yù)處理，如采用吸附、解析、萃取、濃縮、稀釋、提純、衍生化等方法處理樣品。
2.確定儀器配置
所謂儀器配置就是用于分析樣品的方法采用什么進(jìn)樣裝置、什么載氣、什么色譜柱以及什么檢測(cè)器。
一般應(yīng)首先確定檢測(cè)器類型。碳?xì)浠衔锍＿x擇FID檢測(cè)器，含電負(fù)性基團(tuán)(F，Cl等)較多且碳?xì)浜枯^少的物質(zhì)常選擇ECD檢測(cè)器;對(duì)檢測(cè)靈敏度要求不高，或含有非碳?xì)浠衔锝M分時(shí)，可選擇TCD檢測(cè)器；對(duì)于含硫、磷的樣品可選擇FPD檢測(cè)器。
對(duì)于液體樣品可選擇隔膜墊進(jìn)樣方式，氣體樣品可采用六通閥或吸附熱解析進(jìn)樣方法，一般色譜僅配置隔膜墊進(jìn)樣方式，所以氣體樣品可采用吸附-溶劑解析-隔膜墊進(jìn)樣的方式進(jìn)行分析。
根據(jù)待測(cè)組分性質(zhì)選擇適合的色譜柱，一般遵循相似相容規(guī)律。分離非極性物質(zhì)時(shí)選擇非極性色譜柱，分離極性物質(zhì)時(shí)選擇極性色譜柱。色譜柱確定后，根據(jù)樣本中待測(cè)組分的分配系數(shù)的差值情況，確定色譜柱工作溫度，簡(jiǎn)單體系采用等溫方式，分配系數(shù)相差較大的復(fù)雜體系采用程序升溫方式進(jìn)行分析。
常用的載氣有氫氣、氮?dú)狻⒑獾取錃狻⒑獾姆肿恿枯^小，常作為填充柱色譜的載氣；氮?dú)獾姆肿恿枯^大，常作為毛細(xì)管氣相色譜的載氣；氣相色譜質(zhì)譜用氦氣作為載氣。
3.確定初始操作條件
當(dāng)樣品準(zhǔn)備好，且儀器配置確定之后，就可開始進(jìn)行嘗試性分離。這時(shí)要確定初始分離條件，主要包括進(jìn)樣量、進(jìn)樣口溫度、檢測(cè)器溫度、色譜柱溫度和載氣流速。進(jìn)樣量要根據(jù)樣品濃度、色譜柱容量和檢測(cè)器靈敏度來(lái)確定。樣品濃度不超過(guò)10 mg/mL時(shí)，填充柱的進(jìn)樣量通常為1～5μL，而對(duì)于毛細(xì)管柱，若分流比為50∶1，進(jìn)樣量一般不超過(guò)2uL。進(jìn)樣口溫度的確定，除了考慮樣品沸點(diǎn)范圍外，還要考慮色譜柱的使用溫度。原則上講，進(jìn)樣口溫度高一些有利，一般要接近樣品中沸點(diǎn)最高的組分的沸點(diǎn)，但要低于易分解溫度。
4.分離條件優(yōu)化
分離條件優(yōu)化目的就是要在最短的分析時(shí)間內(nèi)達(dá)到符合要求的分離結(jié)果。改變柱溫和載氣流速也達(dá)不到基線分離時(shí)，應(yīng)更換較長(zhǎng)的色譜柱，甚至更換不同固定相的色譜柱，因?yàn)樵贕C中，色譜柱是分離成敗的關(guān)鍵。
5.定性鑒定
所謂定性鑒定就是確定色譜峰的歸屬。對(duì)于簡(jiǎn)單的樣品，可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)照來(lái)定性。就是在相同的色譜條件下，分別注射標(biāo)準(zhǔn)樣品和實(shí)際樣品，根據(jù)保留值確定色譜圖上哪個(gè)峰是要分析的組分。定性時(shí)必須注意，在同一色譜柱上，不同化合物可能有相同的保留值，因此對(duì)未知樣品的定性僅僅用一個(gè)保留數(shù)據(jù)是不夠的，雙柱或多柱保留指數(shù)定性是GC中較為可靠的方法，因?yàn)椴煌幕衔镌诓煌纳V柱上具有相同保留值的幾率要小得多。條件允許時(shí)可采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)機(jī)定性。
6.定量分析
要確定用什么定量方法來(lái)測(cè)定待測(cè)組分的含量。常用的色譜定量方法不外乎峰面積(峰高)百分比法、歸一化法、內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法和標(biāo)準(zhǔn)加入法(又叫疊加法)。峰面積(峰高)百分比法最簡(jiǎn)單，但最不準(zhǔn)確。只有樣品由同系物組成、或者只是為了粗略地定量時(shí)該法才是可選擇的。
相比而言，內(nèi)標(biāo)法的定量精度最高，因?yàn)樗怯孟鄬?duì)于標(biāo)準(zhǔn)物(叫內(nèi)標(biāo)物)的響應(yīng)值來(lái)定量的，內(nèi)標(biāo)物要分別加入到標(biāo)準(zhǔn)樣品和未知樣品中，這樣就可抵消由于操作條件(包括進(jìn)樣量)的波動(dòng)帶來(lái)的誤差。
至于標(biāo)準(zhǔn)加入法，是在未知樣品中定量加入待測(cè)物的標(biāo)準(zhǔn)品，然后根據(jù)峰面積(或峰高)的增加量來(lái)進(jìn)行定量計(jì)算。其樣品制備過(guò)程與內(nèi)標(biāo)法類似但計(jì)算原理則完全是來(lái)自外標(biāo)法。標(biāo)準(zhǔn)加入法定量精度應(yīng)該介于內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法之間。
7.方法驗(yàn)證
所謂方法驗(yàn)證，就是要證明所開發(fā)方法的實(shí)用性和可靠性。實(shí)用性一般指所用儀器配置是否全部可作為商品購(gòu)得，樣品處理方法是否簡(jiǎn)單易操作，分析時(shí)間是否合理，分析成本是否可被同行接受等。可靠性則包括定量的線性范圍、檢測(cè)限、方法回收率、重復(fù)性、重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度等。
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