液相色譜是實(shí)驗(yàn)室使用頻率非常高的儀器設(shè)備，在使用過(guò)程中會(huì)有許多小技巧，小的注意事項(xiàng)，今天按照LC組成部分：
流動(dòng)相溶劑瓶→高壓泵→進(jìn)樣器→色譜柱→檢測(cè)器→廢液。
一、流動(dòng)相溶劑瓶的保養(yǎng)
溶劑瓶是流動(dòng)相的起點(diǎn)，通常是盛放水相溶液或是有機(jī)相溶液。
1、水相溶液，對(duì)于水相溶液來(lái)說(shuō)，首要的問(wèn)題是防止污染。對(duì)于溶劑瓶我們要做的非常重要的工作就是勤換流動(dòng)相，常換常新。
2、有機(jī)相溶液，對(duì)于有機(jī)相溶液，可以不用擔(dān)心細(xì)菌繁殖的問(wèn)題。但是有機(jī)相容易發(fā)生聚合，特別是乙腈在適宜的光照條件下極易發(fā)生聚合，瓶子里就會(huì)出現(xiàn)一些絮狀的聚合沉淀物。為了防止聚合過(guò)程的發(fā)生，裝乙腈時(shí)要用棕色的溶劑瓶，避免陽(yáng)光直射，更換乙腈時(shí)應(yīng)當(dāng)棄去瓶底剩余的溶液。
3、清洗過(guò)濾，溶劑瓶里的過(guò)濾頭，其作用是為了防止溶液瓶中的顆粒雜質(zhì)進(jìn)入到儀器的流路系統(tǒng)中，它的材質(zhì)通常分為玻璃燒結(jié)石英和不銹鋼，如果不慎堵塞會(huì)造成流動(dòng)相吸液不暢，因此必須進(jìn)行清洗，玻璃材質(zhì)的通常是用稀硝酸泡，而不銹鋼材質(zhì)的可以直接進(jìn)行超聲清洗。
二、高壓泵的保養(yǎng)
泵是液相色譜的核心，泵將流動(dòng)相從溶劑瓶輸送到液相流路系統(tǒng)中，并要在高壓下保持流量和壓力的穩(wěn)定。狀態(tài)正常的高壓泵是液相色譜準(zhǔn)確分析的基礎(chǔ)，所以平日一定要重視對(duì)泵的維護(hù)。
1、泵壓力波動(dòng)，很多情況下，泵的問(wèn)題反映在壓力上，壓力波動(dòng)又是常見(jiàn)的一類(lèi)問(wèn)題。通常我們可以通過(guò)重新清洗流路和再次脫氣流動(dòng)相加以解決。
2、過(guò)濾白頭保養(yǎng)，在泵的維護(hù)里還有一項(xiàng)常做的工作就是更換清洗閥上的過(guò)濾白頭，通常判斷的標(biāo)準(zhǔn)是純水以5mL/min流速清洗的時(shí)候，如果壓力超過(guò)1MPa則考慮更換。
三、進(jìn)樣器的保養(yǎng)
進(jìn)樣器分手動(dòng)和自動(dòng)兩大類(lèi)，雖然兩者工作模式不同，但使用的要點(diǎn)是基本一致的。
1、防止交叉污染，自動(dòng)進(jìn)樣器常見(jiàn)的問(wèn)題是交叉污染，交叉污染產(chǎn)生的原因很直接，樣品殘留在進(jìn)樣針內(nèi)外表面，并隨下一次進(jìn)樣進(jìn)入色譜系統(tǒng)。要解決交叉污染，主要靠清洗。
2、精細(xì)操作，手動(dòng)進(jìn)樣器的操作要點(diǎn)大致相同，應(yīng)使用液相色譜LC專用進(jìn)樣針，進(jìn)樣時(shí)插針應(yīng)插到底，不使用時(shí)將針頭留在進(jìn)樣器內(nèi)，使用前后都要及時(shí)清洗。
四、色譜柱的保養(yǎng)
色譜柱是化合物分離的關(guān)鍵。保養(yǎng)良好的色譜柱具有很高的塔板數(shù)，且儀器基線平穩(wěn)。
1、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩（如前所述）。
2、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/span>
3、色譜柱反沖，納譜分析小分子分離液相色譜柱ChromCore系列和EcoPak系列色譜柱可以反沖；納譜分析手性色譜柱UniChiral系列色譜柱可以反沖，反沖可以除去留在柱頭的雜質(zhì)。但是納譜分析生物大分子液相色譜柱BioCore系列色譜柱不要反沖，否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
4、選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
5、避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
6、經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50-75mL。
下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：
硅膠柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴(yán)格脫水。甲醇能洗去殘留的強(qiáng)極性雜質(zhì)，已烷使硅膠表面重新活化。
反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次沖洗，再以相反順序依次沖洗。
如果下一步分析用的流動(dòng)相不含緩沖液，那么可以省略最后用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質(zhì)，在甲醇（乙腈）沖洗時(shí)重復(fù)注射100-200μl四氫呋喃數(shù)次有助于除去強(qiáng)疏水性雜質(zhì)。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類(lèi)脂。有時(shí)也注射二甲亞砜數(shù)次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染。
陽(yáng)離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除去交換性能強(qiáng)的鹽，然后用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有機(jī)物）、甲醇、水依次沖洗。
7、保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過(guò)晚上或更長(zhǎng)時(shí)間。
8、色譜柱使用過(guò)程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
在后兩種情況發(fā)生時(shí)，小心擰開(kāi)柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度（注意把被污染填料取凈）再把柱內(nèi)填料整平。然后用適當(dāng)溶劑濕潤(rùn)的固定相（與柱內(nèi)相同）填滿色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復(fù)到新柱的水平。
柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱（5-30mm），可以起到保護(hù)、延長(zhǎng)柱壽命的作用。采用保護(hù)柱會(huì)損失一定的柱效，這是值得的。
通常以硅膠為基質(zhì)的色譜柱，只能在pH2-9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時(shí)間后，可能有一些吸附作用強(qiáng)的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙稀Ｐ碌纳V柱在使用一段時(shí)間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時(shí)也可補(bǔ)加填料使柱效恢復(fù)。
每次工作完后，用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應(yīng)用無(wú)鹽流動(dòng)相沖洗。含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會(huì)腐蝕不銹鋼管道，不宜長(zhǎng)期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應(yīng)每隔4-5天開(kāi)機(jī)沖洗15分鐘。
五、檢測(cè)器的保養(yǎng)
1、光源部分
檢測(cè)器中非常重要的部件是光源，光源對(duì)發(fā)射能量有要求，一旦能量衰減到一定程度，就會(huì)出現(xiàn)基線噪聲變大，靈敏度降低等一系列影響使用的問(wèn)題，因此光源是一個(gè)消耗品。通常紫外燈的壽命是2000h，當(dāng)?shù)竭_(dá)這個(gè)時(shí)限的時(shí)候，我們就要特別關(guān)注燈的能量狀況，可以通過(guò)儀器維護(hù)軟件中自帶的“燈能量測(cè)試”功能來(lái)判斷，測(cè)試的結(jié)果會(huì)分別評(píng)估低、中、高三個(gè)波長(zhǎng)段的能量，一旦某個(gè)波長(zhǎng)段的測(cè)試結(jié)果顯示失敗，就表示需要更換燈。
2、檢測(cè)池
檢測(cè)器中另一個(gè)重要部件是檢測(cè)池，也叫流通池。通常大家關(guān)心的一個(gè)問(wèn)題是檢測(cè)池被堵掉，因?yàn)闄z測(cè)池通常不是很耐壓，所以一旦被堵就很可能造成損壞。事實(shí)上檢測(cè)池通常不太容易被堵，原因是幾乎所有的顆粒雜質(zhì)都會(huì)被色譜柱攔下了，所以堵塞檢測(cè)器的東西基本都不是來(lái)自樣品的，很可能是后來(lái)“產(chǎn)生”的，比如含鹽流動(dòng)相殘留在檢測(cè)池中導(dǎo)致鹽析出。
六、廢液的處置
液相色譜儀LC的廢液大部分含有有機(jī)溶劑，會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生一定的危害，對(duì)環(huán)境也會(huì)產(chǎn)生污染，嚴(yán)禁隨意傾倒，應(yīng)及時(shí)處理。目前，國(guó)內(nèi)大部分實(shí)驗(yàn)室是將廢液送到專門(mén)的廢液處理站集中進(jìn)行無(wú)害化處理。
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